湖泊科学   2023, Vol. 35 Issue (2): 473-482.  DOI: 10.18307/2023.0208
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研究论文——生物地球化学与水环境保护

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朱智杰, 陈默, 薛思敏, 周仕伟, 焦一滢, 田小方, 氮和磷是影响三峡库区香溪河表层沉积物中微生物群落结构的主要因素. 湖泊科学, 2023, 35(2): 473-482. DOI: 10.18307/2023.0208
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Zhu Zhijie, Chen Mo, Xue Simin, Zhou Shiwei, Jiao Yiying, Tian Xiaofang. Nitrogen and phosphorusas major factors shaping microbial community structures in surface sediments in Xiangxi River, Three Gorges Reservoir. Journal of Lake Sciences, 2023, 35(2): 473-482. DOI: 10.18307/2023.0208
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基金项目

国家自然科学基金项目(41807452)资助

通信作者

陈默, E-mail: 20170116@hubu.edu.cn

文章历史

2022-07-24 收稿
2022-11-03 收修改稿

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氮和磷是影响三峡库区香溪河表层沉积物中微生物群落结构的主要因素
朱智杰1 , 陈默1 , 薛思敏1 , 周仕伟1 , 焦一滢2 , 田小方2     
(1: 湖北大学资源环境学院, 区域开发与环境响应湖北省重点实验室, 武汉 430062)
(2: 湖北工业大学土木建筑与环境学院, 河湖生态修复及藻类利用湖北省重点实验室, 武汉 430068)
摘要:香溪河是三峡库区最大的入库支流, 目前关于香溪河沉积物微生物群落结构特征及其主要影响因素尚不明确。本研究监测香溪河上、中、下游上覆水及沉积物的主要理化指标, 通过16S rDNA高通量测序研究香溪河表层沉积物中微生物群落结构特征, 使用统计学软件分析细菌与理化指标间的关系。结果表明, 上覆水中氨氮(NH3-N)、叶绿素a(Chl.a)浓度自下游向上游逐渐升高, 其中NH3-N浓度从下游的2.04 mg/L升高到上游的3.14 mg/L。不同点位上覆水中磷酸盐(PO43-)浓度在0.14~0.18 mg/L之间波动; 同一点位间隙水中NH3-N、PO43-浓度明显高于上覆水, 10~15 cm沉积物间隙水中NH3-N与PO43-浓度分别是0~5 cm沉积物间隙水的3.4倍和1.7倍。沉积物中Fe(Ⅱ)、Fe(Ⅲ)、酸可挥发性硫化物和铬还原性硫化物含量均表现为上游点位高于中游、下游, 底层沉积物含量高于中层和表层。香溪河中游沉积物的微生物多样性和丰富度高于下游和上游, 其中变形菌门(Proteobacteria)是表层沉积物中的优势菌门, 鞘脂单胞菌属(Sphingomonas)为主要菌属。不同代谢功能的微生物在空间分布上存在差异, 比如具有降解多环芳烃能力的外新鞘脂菌属(Novosphingobium)和土生单胞菌属(Terrimonas)在下游点位的相对丰度最高, 分别达到5.8%和5.4%, 硝化螺旋菌属(Nitrospira)和黄杆菌属(Flavobacterium)在中游的相对丰度最高, 而铁氧化菌水杆菌属(Aquabacterium)主要分布在上游点位。冗余分析(RDA)表明总有机碳、硫酸根、Fe(Ⅱ)、氨氮和总磷是影响香溪河沉积物中微生物群落结构的主要环境因子。本研究有助于进一步了解周边环境和人为活动对香溪河水质稳定及沉积物中微生物的影响, 为三峡库区水环境改善和管理提供参考。
关键词香溪河    上覆水    沉积物    微生物群落    环境因子    三峡库区    
Nitrogen and phosphorusas major factors shaping microbial community structures in surface sediments in Xiangxi River, Three Gorges Reservoir
Zhu Zhijie1 , Chen Mo1 , Xue Simin1 , Zhou Shiwei1 , Jiao Yiying2 , Tian Xiaofang2     
(1: Key Laboratory of Regional Development and Environmental Response of Hubei Provincial, College of Resources and Environment, Hubei University, Wuhan 430062, P. R. China)
(2: Key Laboratory of River and Lake Ecological Restoration and Algae Utilization of Hubei Provincial, College of Civil Architecture and Environment, Hubei University of Technology, Wuhan 430068, P. R. China)
Abstract: Xiangxi River is the largest inflow tributary in the Three Gorges Reservoir area. Structural characteristics and influence factors of the microbial communities in sediments of Xiangxi River are not clear so far. This study investigated the main physical and chemical parameters of the overlying water (i.e., surface, middle and bottom layers) and sediments of the Xiangxi River. 16S rDNA high-throughput sequencing was used to reveal the characteristics of microbial community structures in the sediments. In addition, the relationship between bacteria and physicochemical parameters were analyzed statistically. Chlorophyll.a (Chl.a), concentrations of ammonia nitrogen (NH3-N) in the overlying water increased gradually from the downstream (2.04 mg/L) to the upstream (3.14 mg/L). The concentrations of phosphate (PO43-) in overlying water fluctuated between 0.14 and 0.18 mg/L at different sampling sites. In addition, the concentrations of NH3-N and PO43- in the pore-water at the same site were significantly higher than those in the overlying water. Pore-water NH3-N and PO43- concentrations at 10-15 cm depth were 3.4 and 1.7 times higher than those at 0-5 cm depth in sediments, respectively. Higher contents of Fe (Ⅱ), Fe (Ⅲ), acid volatile sulfide and chromium reducing sulfide were observed in the upstream sampling sites and bottom layers of the sediments. The microbial diversity and richness in the sediments of midstream were higher compared to the sediments of downstream and upstream. Proteobacteria was the dominant phylum in the surface sediments, and Sphingomonas was the main genus. The spatial distributions of microorganisms for different metabolic activities varied. Typical bacteria with the ability to degrade polycyclic aromatic hydrocarbons, such as Novosphingobium and Terrimonas, were mainly observed in the sediments of downstream sites with percentage reaching 5.8% and 5.4%, respectively. The percentages of Nitrospira and Flavobacterium were highest in the midstream. The iron-oxidizing bacteria (i.e., Aquabacterium) were rich in the upstream sites. Redundancy analysis (RDA) showed that total organic carbon (TOC), sulfate (SO42-), Fe (Ⅱ), NH3-N and total phosphorus (TP) were the main environmental factors shaping the microbial community structures in sediments of Xiangxi River. This study will help to further understand the impacts of surrounding environment and human activities on the stability of water quality and the microorganisms in the sediments of Xiangxi River, and provide a reference for the improvement and management of the water environment in the Three Gorges Reservoir area.
Keywords: Xiangxi River    overlying water    sediments    microbial community structures    environmental factors    Three Gorges Reservoir    

香溪河是三峡水库在湖北境内最大的入库支流[1]。近年来,由于周边磷矿开发和频繁的人为活动导致氮、磷等营养元素不断汇入香溪河,部分河段出现了蓝藻水华问题[2]。当外源污染物沉降至水体表层沉积物后,将不断累积形成内源污染,并在一定条件下向水体释放,进一步影响香溪河水质稳定[3]。微生物是淡水生态系统中的重要组成部分,在沉积物的物质循环中发挥了重要的作用[4]。有研究表明,微生物是沉积物有机碳分解代谢的主要参与者之一[5],还能通过硝化与反硝化作用介导氮循环过程[6]。此外,微生物参与了沉积物中磷的迁移、转化等过程[7]。香溪河中微生物固氮对水体富营养化产生的贡献也不容忽视[8-9]

有研究表明,三峡库区沉积物的总氮(TN)含量对硝化细菌群落有明显的影响,pH、硝态氮(NO3--N)和氨氮是影响反硝化细菌的主要因素[10]。总无机碳、总有机碳和叶绿素a浓度是影响三峡库区大宁河、香溪河自养微生物分布的主要环境因子[11]。沉积物TN和NO3--N含量对香溪河沉积物中氨氧化古菌和氨氧化细菌的分布有显著的影响,NO3--N与厌氧氨氧化菌的相对丰度呈显著负相关[12]。目前对于香溪河沉积物中微生物时空分布特征的研究主要集中于单一种类微生物[13],而对于沉积物中整个微生物群落的空间分布以及其对环境因子的响应尚不明确。

本研究采集了香溪河上、中、下游共计6个点位的上覆水和沉积物样品,解析了不同点位上覆水和沉积物中理化指标的空间分布特征,采用16S rDNA基因测序分析技术分析表层沉积物中微生物群落多样性和组成,研究了环境因子对微生物群落结构的影响。本研究为进一步探究周边环境对香溪河水质的影响提供了科学依据,有助于揭示香溪河主要水环境问题内在的微生物机制,为改善三峡库区水环境质量和保障流域安全提供参考。

1 材料与方法 1.1 研究区域概况

香溪河位于湖北省西部,发源于神农架林区,全长97.3 km,河口距离三峡大坝34.5 km,流域面积3183 km2,自然落差1054 m[14]。自三峡大坝蓄水后,香溪河由自然河道转变为河流型水库,当三峡水库蓄水至175 m时,库湾回水长度约为42 km[15]。香溪河流域矿产资源丰富,其中磷矿储量达3.85亿t,是中国三大富磷矿区之一,磷化工已成为当地支柱产业[16]。近年来,香溪河沿岸磷矿开发地表径流及生活污水汇入香溪河流域[17],同时香溪河上游兴山县人口密度大、农业发达,农业生产中所产生的面源污染也为香溪河带来了大量的氮、磷等污染物[18]。此外,由于香溪河水流速度减慢,水体交换变少,对氮、磷等营养元素的运输能力降低,最终造成了一定程度的富营养化问题[19]。香溪河局部水域多次发生过水华,影响库区水质安全[20]

1.2 样品采集及保存

根据香溪河自然地貌特征及水流方向,自香溪河河口向上游共选择6个采样点,其中S1、S2靠近河口,属于下游点位,S3、S4为中游点位,S5、S6为上游点位。采样点位见图 1

图 1 香溪河采样点位 Fig.1 Sampling sites of Xiangxi River

2021年8月30日,用取水器分别采集了S1~S6点位的表层、中层、底层上覆水,其中表层上覆水样品采集于水面下2 m处,由于不同河段水深不同,中层、底层上覆水于不同深度处分别采集。具体而言,下游S1、S2分别在距水面30和65 m处,中游S3、S4分别在20和40 m处,上游S5、S6分别在15和30 m处。上覆水样品采集后装入500 mL聚乙烯样品瓶中,4~6 h内运回实验室,立即测定上覆水中氨氮(NH3-N)、磷酸盐(PO43-)、可溶性硫化物(∑H2S)、硫酸根(SO42-)、总氮(TN)和总磷(TP)浓度。

上覆水样品采集完毕后,再使用沉积物柱状采样器分别在每个点位采集3根柱状沉积物样品,每根柱状沉积物代表该点位1个平行样品。沉积物样品厚度不少于30 cm,以5 cm为一层进行切割,现场将各层沉积物样品装入聚乙烯封口袋中,4~6 h内运回实验室。部分新鲜沉积物样品用于测定酸可挥发性硫化物(AVS,主要成分为FeS)、铬还原性硫化物(CRS,主要成分为FeS2)、Fe(Ⅱ)和Fe(Ⅲ),另取部分新鲜沉积物样品于15 mL离心管中,10000转/min离心0.5 min后取上清液,过0.45 μm滤膜,测定间隙水中NH3-N、PO43-、∑H2S和SO42-浓度。此外,将部分沉积物自然风干后研磨,测定TN、TP和总有机碳(TOC)含量。剩余沉积物样品于-20℃保存,备用。

1.3 上覆水与沉积物理化因子测定

现场使用多参数测量仪(YSI ProDss,USA)测定采样点位不同深度上覆水中溶解氧(DO)浓度、pH、电导率(σ)和Chl.a浓度。上覆水及沉积物间隙水NH3-N浓度采用纳氏试剂分光光度法测定,PO43-浓度采用钼酸铵比色法测定,TN、TP浓度则在水样中分别加入碱性过硫酸钾,121℃消解30 min,再通过紫外分光光度法和钼酸铵比色法进行测定。∑H2S浓度采用亚甲基蓝比色法测定[21],SO42-浓度采用Tabatabai的浊度比色法进行测定[22]。沉积物中AVS、CRS含量的测定采用冷扩散分级提取法,即取2 g新鲜沉积物于具塞广口瓶中,以10 % 的碱性乙酸锌为吸收液,用9 mol/L盐酸(HCl)对沉积物提取24 h,所得吸收液的硫化物浓度换算得到AVS含量。更换吸收液后,用经过Zn粒还原的Cr(Ⅱ)溶液对沉积物提取24 h,所得吸收液的硫化物浓度经换算得到CRS含量[23]。沉积物中Fe(Ⅱ)、Fe(Ⅲ)含量用Ferrozine比色法测定,在加入10 % 的盐酸羟胺溶液将Fe(Ⅲ)还原为Fe(Ⅱ)后经比色测定[24],沉积物TOC含量采用重铬酸钾-油浴法测定[21]

1.4 沉积物微生物群落结构分析

采用土壤基因组试剂盒(PowerSoil®DNA,MOBIO)对各点位的3份柱状沉积物平行样品分别提取基因组总DNA,用超微量分光光度计(Nanodrop 2000,Wilmington,USA)测定DNA浓度。采用通用引物338F(5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3',806R5'-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3')对细菌16S rDNA基因的V3~V4区进行PCR扩增,扩增体系为5×FastPfuBuffer 4 μL、2.5 mmol/L dNTPs 2 μL、Forward Primer (5 μmol/L) 0.8 μL、Reverse Primer (5 μmol/L) 0.8 μL、FastPfu Polymerase 0.4 μL、DNA模板10 ng,补充ddH2O至20 μL。PCR扩增的反应体系为:94℃,5 min;30×(94℃,30 s;54℃,30 s;72℃,45 s);72℃ 10 min。修饰后的通用引物含有不同的Tag标签用以区分不同。DNA样品送测序公司进行高通量测序,Illumina测序平台产生的初始数据采用开放的软件包QⅡME(http://qiime.org/)进行分析。测得微生物数据使用R.3.4.3中的Vegan包进行数据预处理、α多样性和相对丰度的计算,并在门和属水平上选择OTU数量排名前20的微生物进行β多样性分析,使用Origin-pro 2018绘制热图完成数据的可视化,通过冗余分析(RDA)判断环境因子与微生物群落分布的关系。构建结构方程模型(structral equation modeling,SEM)分析不同理化指标与微生物丰度之间的关系,通过计算通径系数揭示各个理化因子对微生物生长和繁殖影响的强弱。

1.5 数据处理与分析

用Excel 2012软件计算数据平均值、标准差,在SPSS 20软件中采用单因子方差分析(ANOVA)检验水体理化因子间差异的显著性,P < 0.05视为具有显著性差异,使用Duncan法进行事后检验。

2 结果与讨论 2.1 上覆水中理化因子空间分布特征

附图Ⅰ所示,从下游河口(S1、S2)到上游点位(S5、S6)水深逐渐变浅,且不同点位的Chl.a浓度均表现为随深度先降低后增加的趋势。下游S1、S2点位表层上覆水和底层上覆水的Chl.a浓度均不超过3.75 μg/L,低于中游(S3、S4点位)的平均值4.53 μg/L和上游(S5、S6点位)的平均值4.93 μg/L。藻类可以通过光合作用产生有机物[25],藻类的沉降和死亡将导致藻源有机物累积在表层沉积物,形成以藻类为主的有机质颗粒[26]。因此,香溪河沉降的藻类为沉积物中微生物提供了潜在的有机物来源。

各点位表层上覆水中NH3-N浓度均不超过0.09 mg/L,随着深度增加,上覆水中NH3-N浓度逐渐升高,最大值出现在上游S5点位底层上覆水中,浓度达到0.82 mg/L(附图Ⅱ)。沉积物间隙水中NH3-N浓度显著高于上覆水(P < 0.05),其中10~15 cm间隙水NH3-N平均浓度达到4.25 mg/L,是0~5 cm沉积物间隙水的3.4倍,是底层上覆水的6倍。在6个采样点位中,下游S1、S2点位间隙水NH3-N浓度在2.04~2.30 mg/L之间,低于上游S5、S6点位的3.14 mg/L,上游沉积物间隙水中更高的NH3-N浓度为参与氮循环的微生物提供了潜在的反应底物。香溪河上游兴山县耕地面积达19.51×103 hm2,其施肥季集中在春、夏两季,农业耕作对香溪河中NH3-N浓度影响较大[27],上游农业面源污染可能是导致上游点位上覆水和间隙水中NH3-N浓度较高的重要原因之一(附图Ⅱ)。另外,此次采样正值夏季,长江干流换水量增大,含有较低营养盐浓度的干流水体大量进入下游库湾,对下游水体产生稀释作用,也会导致下游点位NH3-N浓度低于上游和中游[28]

PO43-浓度垂向分布表现为从上覆水到间隙水逐渐上升(附图Ⅱ)。所有点位的表层上覆水中PO43-浓度均未超过0.09 mg/L,而底层上覆水达到0.15 mg/L以上;间隙水中PO43-浓度均值进一步从0.28 mg/L(0~5 cm沉积物)上升到0.55 mg/L(10~15 cm沉积物)。香溪河流域内磷化工企业分布较多,磷矿废弃地和堆积的矿渣经雨水淋溶后随地表径流流入香溪河[29],同时农业面源污染也是香溪河流域磷的主要来源之一[27]。外源磷的不断输入,最终造成了香溪河沉积物中磷的累积。

近年来,不断增加的人类活动和气候变化导致全球淡水水体中SO42-浓度不断上升,煤炭燃烧和二氧化硫的排放导致中国淡水湖泊、河流中SO42-浓度上升[30],香溪河上、中、下游上覆水中SO42-浓度在30~40 mg/L之间(附图Ⅱ),而间隙水中SO42-浓度表现出一定的空间差异,中游(S3、S4点)及上游(S5和S6点位)间隙水的SO42-浓度分别约为下游的1.7倍和1.5倍(附图Ⅱ)。SO42-为沉积物中微生物硫酸盐还原提供电子受体[31],这表明上游与中游沉积物中微生物硫酸盐还原作用可能更为强烈。

沉积物TOC含量从下游至上游逐渐升高(附图Ⅲ),下游S1和S2沉积物中TOC含量均未超过1.50 mg/g,而上游(S5和S6)达到2.08 mg/g。Fe(Ⅱ)和Fe(Ⅲ)含量自下游S1至上游S6点位逐渐升高(附图Ⅲ),10~15 cm沉积物中Fe(Ⅱ)含量从S1点位的0.91 mg/g上升至S6点位的超过1.40 mg/g,Fe(Ⅲ)含量从1.08 mg/g升高至1.55 mg/g。铁氧化菌和铁还原菌介导了沉积物中微生物铁元素循环[32],香溪河沉积物中铁元素含量的空间差异表明不同点位沉积物中参与铁循环的细菌其分布可能存在一定的差异。

沉积物AVS含量的分布存在明显的垂直差异和空间差异(附图Ⅲ)。在垂直方向上,下游S1、S2点位AVS含量低,且差异不显著(P > 0.05),中游、上游各点位AVS含量均表现为自表层沉积物向底层沉积物逐渐升高,尤其是中游S3点位,AVS含量自0~5 cm层的0.03 mg/g升高至10~15 cm层的0.33 mg/g,升高约10倍。在6个采样点位中,自下游至上游沉积物中AVS含量逐渐升高,S1、S2点位的AVS含量均不超过0.07 mg/g,远低于上游S5、S6平均值(0.44 mg/g)。CRS分布规律与AVS类似,表现为从下游至上游、自表层向深层沉积物的CRS含量逐渐上升(附图Ⅲ)。

2.2 表层沉积物中微生物群落的α多样性分析

通过分析不同深度上覆水和沉积物中理化指标的分布特征发现,沉积物是香溪河上覆水中氮、磷等营养元素的重要“源”之一(附图Ⅱ)。表层沉积物是泥水界面物质迁移转化最为活跃的区域[33],其中的微生物在水生态系统的元素地球化学循环中发挥着重要的作用[34]。因此,本研究选择表层沉积物开展微生物群落结构研究。

Shannon指数和Simpson指数反映群落整体的多样性[35],Chao1指数和ACE指数反映群落的丰富度[36]。如附图Ⅳ所示,中游沉积物中微生物群落的Shannon指数、Chao1指数和ACE指数均高于上游和下游。因此,香溪河中游表层沉积物的微生物群落多样性和丰富度高于上游和下游,在整体上呈现出“中间高,两头低”的分布规律。香溪河上游河段与部分支流交汇,下游河段与长江回水交汇,上、下游水体交换较为频繁,而中部水体则相对稳定,为微生物的生长和繁殖提供了良好的环境[37],造成了香溪河不同河段表层沉积物中微生物群落α多样性的差异。此外,在采样过程中发现上游的表层沉积物以无机砂石为主,无法为异养微生物提供足够的有机底物,这可能也是中游微生物相对丰度高于其他河段的原因。

2.3 微生物群落的β多样性

非度量多尺度分析(NMDS)是通过对样本的距离矩阵作降维分析简化数据结构,在特定的距离尺度下描述样本的分布特征。如图 2所示,上游点位主要出现在第二象限,中游点位主要出现在第一象限,下游点位主要出现在第三、四象限,这表明香溪河不同河段沉积物中微生物群落存在明显的空间分布差异。

图 2 不同点位沉积物微生物群落结构非度量多维尺度(NMDS)排序图 Fig.2 NMDS analysis of microbial community structures in sediments of different sampling sites

图 3a列举了在门水平上相对丰度前10的微生物,其中变形菌门(Proteobacteria)占主导地位,在各点位相对丰度均超过30 %。另外,相对丰度超过5 % 的菌门包括酸杆菌门(Acidobacteriota)、拟杆菌门(Bacteroidota)、绿弯菌门(Chloroflexi)和放线菌门(Actinobacteriota)。其他主要微生物还有疣微菌门(Verrucomicrobiota)、厚壁菌门(Firmicutes)、硝化菌门(Nitrospirota)、脱硫菌门(Desulfobacterota)和浮霉菌门(Planctomycetota)等。

图 3 不同点位沉积物中微生物门水平相对丰度(a)及属水平OTU数量(b) Fig.3 Relative abundances of microbiota at the phylum level (a) and OTU numbers at the genus level (b) in sediment samples at different sampling sites

鞘脂单胞菌属(Sphingomonas)是属水平上在香溪河沉积物中分布最广的微生物类群,各点位相对丰度均在5.6 % ~5.7 % 之间(图 3b)。有研究表明,Sphingomonas参与了沉积物有机物的好氧生物降解过程[38],推测Sphingomonas在香溪河沉积物有机物降解中发挥了重要作用。外新鞘脂菌属(Novosphingobium)能降解2~5环的多环芳烃(PAHs)[39],土生单胞菌属(Terrimonas)对PAHs也有一定的降解能力,且PAHs对其生长和繁殖有一定的促进作用[40]。本研究中Novosphingobium在下游S1点位相对丰度约为6 %,高于其他各点位的4.9 % ~5.1 %;Terrimonas在S1点位的相对丰度也高于其他点位(图 3b)。S1点位地处河口,与长江水体交换频繁,受长江影响较大,有研究表明,丰水期长江干流PAHs总量较高,会对香溪河库湾产生一定的扩散作用[41],这可能是NovosphingobiumTerrimonas在下游点位丰富度最高的原因之一。

硝化螺旋菌属(Nitrospira)是一种硝化细菌,能将NH4+-N氧化为硝态氮(NO3--N)[42]。香溪河中游S3点位0~5 cm沉积物间隙水中NH4+-N含量最高,分别是下游S2点位和上游S6点位的3倍和5倍(附图Ⅱ),这与不同点位Nitrospira的分布差异一致(图 3b),这表明中游沉积物中更高的NH4+-N浓度为Nitrospira的生长和繁殖提供了良好的生存条件。另外,有研究表明,部分Flavobacterium属微生物具有反硝化能力[43],其分布规律与Nitrospira类似,相对丰度的峰值也出现在中游S3点位(图 3b),推测Flavobacterium属微生物可能参与了香溪河沉积物的N循环过程,尤其在中游沉积物中。

水杆菌属(Aquabacterium)作为一种铁氧化细菌,能够能将Fe(Ⅱ)氧化为Fe(Ⅲ)[44]。本研究中Aquabacterium相对丰度在S6点位为6.2 %,约为其他点位的2.5倍(图 3b)。同样作为铁氧化菌[45],泉发菌属(Crenothrix)分布特征与Aquabacterium相反,其在S6点位相对丰度最低(图 3b),这表明CrenothrixAquabacterium在香溪河沉积物的铁氧化过程中可能存在一定的竞争关系。另外,有研究表明,Crenothrix主要分布在近海海域、河口以及深海热泉喷口处,当溶解氧浓度较高时其相对丰度升高[46]。香溪河口与长江干流交汇处水体流速较快、水体交换频繁,溶解氧浓度较高,自河口向上游溶解氧浓度逐渐降低[47],这可能是Crenothrix在河口分布较广,上游分布较少的原因。

2.4 微生物群落结构与环境因子间的关系

为研究不同环境因子与微生物生长和繁殖的关系,建立路径分析模型探究各因子对微生物丰度的影响,本研究中构建以各个环境因子为影响因素的结构方程模型(图 4a),标准化的路径系数绝对值越大,相对应的理化指标对微生物丰度的影响越强烈。NH3-N和PO43-的标准化路径系数分别为-2.25和2.46,其系数的绝对值远高于其他理化指标,这说明NH3-N和PO43-对微生物丰度的影响起主导作用,NH3-N浓度与微生物丰度呈负相关,而PO43-浓度与微生物丰度呈正相关,此外,SO42-、TP和Fe(Ⅱ)对微生物丰度也有着一定影响。

图 4 理化因子对微生物丰度影响的结构方程模型(路径旁显示标准化的路径系数,实线和虚线分别表示P<0.05和P>0.05。箭头上数值的正负分别表示正相关关系和负相关关系)(a)及沉积物微生物群落结构与环境因子的冗余分析(b) Fig.4 Structural equation model of effects of physical and chemical parameters on the abundance of microorganism (The standardized path coefficient is displayed next to the path, and the solid line and dotted line indicate P < 0.05 and P > 0.05, respectively. The positive and negative values on the arrow indicate positive correlation and negative correlation, respectively) (a) and redundancy analysis between microbial community structure and environmental factors in sediments (b)

采用冗余分析方法(RDA)分析属水平微生物物种丰富度与环境因子间的关系,由于许多环境因子间存在着较强的共线性,因此在进行RDA分析前先采用方差膨胀因子(variance inflation factor, VIF)分析过滤掉VIF值大于10的环境因子[48]。如图 4b所示,第1排序轴与第2排序轴的解释度分别为57.63 % 和12.63 %。环境因子向量的长短代表其对于细菌群落影响的大小,环境变量与物种箭头之间的夹角反映它们之间的相关性,锐角是正相关,夹角越小,正相关性越强,钝角是负相关,钝角越大,负相关性越强[49]。TOC、SO42-、Fe(Ⅱ)、NH3-N和TP对香溪河表层沉积物中微生物的群落结构有着显著的影响(图 4b),这一发现与周边的农业生产和磷矿开采的现状相呼应,反映了人为活动导致的环境污染对香溪河沉积物微生物群落结构的影响。具体到微生物水平来看,在属水平上与TOC含量呈正相关的是Sphingomonas、NovosphingobiumTerrimonas属(图 4b)。另外,NH3-N浓度与NitrospiraFlavobacterium属的分布呈正相关性,这进一步印证了NitrospiraFlavobacterium属在氮循环中发挥了一定作用。有研究表明当金属离子的浓度过高超过微生物的耐性值时,会引起微生物的群落结构发生改变[50],本研究中Fe(Ⅱ)与大多数微生物分布呈负相关(图 4a4b),Fe(Ⅱ)对香溪河微生物群落的影响值得进一步研究。

本研究表明,香溪河上覆水中NH3-N浓度自下游至上游逐渐升高,底层沉积物中NH4+-N浓度高于表层沉积物;PO43-浓度在垂直方向上表现为自表层上覆水至底层沉积物逐渐升高。香溪河各点位底层、中层上覆水中TP浓度均超过长江干流宜昌断面夏季所监测TP浓度(1.0 mg/L)[51],可能对长江水质稳定产生一定的影响,需要加强对香溪河流域氮、磷含量的监测和控制。此外,NH3-N和PO43-的浓度是影响沉积物中微生物生长和繁殖的最主要因素。当前,国家对三峡流域水环境保护高度重视,香溪河沿岸的农业生产、磷矿开采以及周边城镇的生活污水是导致香溪河水体中氮、磷浓度波动的主要原因[52]。为了有效解决香溪河流域水环境污染问题,要坚持在农业生产中对化肥农药减量增效,对磷矿和磷化工企业进行产业升级,对农副产品加工等行业深度治理、综合利用,同时还要完善城镇和农村生活污水收集及处理设施建设,做到点面结合、综合治理。此外,硫酸根浓度的升高是淡水水体发生黑臭的重要诱因之一[53],今后的工作需加强对香溪河流域SO42-浓度水平的监控。

3 结论

1) 相较于下游河段,香溪河上、中游上覆水与沉积物中N、P含量更高,上游上覆水中NH3-N平均浓度是下游的1.5倍,上游沉积物间隙水中NH3-N平均浓度为下游的1.4倍。上、中游沉积物间隙水中PO43-平均浓度分别是下游的1.5倍、1.6倍。此外,沉积物中TOC、AVS、CRS、Fe(Ⅱ)和Fe(Ⅲ)含量在上游更高。

2) 中游表层沉积物中微生物多样性和物种丰富度均高于上游和下游。各点位在门水平上和属水平上分别以变形菌门和鞘脂单胞菌属为主。参与氮循环的微生物硝化螺旋菌属和黄杆菌属主要分布在NH3-N浓度较高的中游点位;对多环芳烃(PAHs)有一定降解作用的外新鞘脂菌属和土生单胞菌属主要分布在下游河口点位;由于上游点位Fe(Ⅱ)含量较高,铁氧化菌水杆菌属主要分布在上游点位。

3) NH4+-N、TP、TOC、SO42-和Fe(Ⅱ)是影响香溪河沉积物中微生物群落结构的主要环境因子,这在一定程度上印证了香溪河流域氮、磷污染现状对沉积物中微生生物群落的影响。另一方面,不同河段沉积物中微生物群落结构的差异也可能在一定条件下改变环境因子的分布,进而影响香溪河水质稳定。今后应进一步加强香溪河流域农业生产和磷化工行业监管,完善周边区域生活污水收集与处理。

4 附录

附图Ⅰ~Ⅳ见电子版(DOI:10.18307/2023.0208)。

附图Ⅰ 不同深度上覆水中叶绿素浓度 AttachedFigure1 Distribution of Chlorophyll-a concentration in the overlying water at different depth
附图Ⅱ 上覆水与间隙水理化指标剖面特征 AttachedFigure2 Profiles of physicochemical parameters in overlying water and pore-water
附图Ⅲ 表层沉积物理化指标剖面特征 AttachedFigure3 Profiles of physicochemical parameters in surface sediments
附图Ⅳ 微生物群落α多样性指数 AttachedFigure4 Alpha diversity parameters of microbial community
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